Évaluation in vitro d’Achillea millefolium sur la production et la stimulation de cellules fibroblastiques cutanées humaines (HFS-PI-16)
Référence : Medical Archives 2015. — PMC4610620 / PMID 26543303 · DOI 10.5455/medarh.2015.69.212-217 Type : etude in vitro · Plante : Achillee millefeuille · Propriété → Peau Accès : ⭐ libre (open access) → texte intégral traduit Fidélité : traduction intégrale et fidèle du texte des auteurs. Appels [n] omis ; figures/tableaux « [ ] ».
Résumé
Objectif : Dans la présente étude, nous avons visé les effets de l’extrait hydroalcoolique d’Achillea millefolium (HEAML) sur la prolifération, la stimulation et les propriétés de croissance des cellules fibroblastiques cutanées humaines (HSF-PI-16).
Méthodes : Initialement, en utilisant une culture monocouche de HSF-PI-16, nous avons créé une méthode de rayure à une ligne comme fermeture de plaie in vitro et, après 3 jours, nous l’avons surveillée par microscopie inversée.
Résultats : HEAML a inhibé sélectivement la prolifération des cellules HSF-PI-16 à concentration plus élevée (>20,0 mg/mL), et l’a stimulée à des concentrations plus faibles (<20,0 mg/mL). Ensuite, après des traitements des milieux HSF-PI-16 jusqu’à 72 h, HEAML a démontré des taux de prolifération significativement élevés (p<0,05) et une stimulation dans un essai de blessure par rayure (p<0,04). De plus, l’analyse morphologique des cellules HSF-PI-16 dans les milieux de culture a détecté les figures de cellules rondes à fusiformes, non adhérentes, immatures et matures.
Conclusion : Ces résultats démontrent clairement l’absence de tout effet toxique de HEAML sur les fibroblastes cutanés humains. À notre connaissance, il s’agit du premier rapport élucidant les mécanismes d’action potentiels de HEAML sur la prolifération et la stimulation des fibroblastes, offrant une meilleure perception et une meilleure compréhension de son effet dans des études futures.
1. INTRODUCTION
De nos jours, les plantes médicinales sont largement utilisées dans le monde comme alternative aux médicaments pharmaceutiques. Bien que les produits à base de plantes soient considérés comme ayant moins d’effets indésirables que les médicaments de synthèse, ils ne sont pas complètement exempts d’effets secondaires ou de toxicité. Des études phytochimiques, pharmacologiques et cliniques récentes sur diverses espèces ont confirmé leurs propriétés ethnomédicinales. Achillea millefolium L. (Asteraceae) est largement utilisée en Europe comme remède à base de plantes pour le traitement des spasmes, tels que les troubles digestifs, comme emménagogue, et pour les menstruations irrégulières. Plusieurs constituants d’A. millefolium, notamment des monoterpènes, des sesquiterpènes, des flavonoïdes et des dérivés de l’acide caféoylquinique, ont été rapportés. Chaque classe de phytoconstituants peut expliquer au moins en partie des propriétés médicinales spécifiques d’A. millefolium. Les feuilles et les fleurs d’A. millefolium sont utilisées depuis des siècles pour des actions anti-inflammatoires, telles que le rhumatisme, l’inflammation cutanée et la rhinite allergique, la cicatrisation des plaies et l’amélioration de la diaphorèse et de l’hypertension artérielle. La culture de cellules et de tissus végétaux est une technologie utile pour produire des composés bioactifs spécifiques aux plantes, et de nombreuses cultures de racines chevelues de celle-ci, qui présentent des stabilités génétiques et biochimiques similaires à celles de la plante mère, sont établies pour une production plus stable et efficace de leurs constituants actifs.
Les fibroblastes jouent une fonction potentielle dans la prolifération et la migration en réponse aux cytokines chimiotactiques, mitogènes et modulatrices, ainsi qu’aux interactions autocrines et paracrines, et ces cellules ont de nombreuses applications en ingénierie tissulaire, en génétique et en recherche sur le vieillissement, dans le diagnostic des troubles peroxysomaux, le transfert nucléaire cellulaire et la reprogrammation cellulaire. Après une lésion sévère, les fibroblastes infiltrent la plaie, sécrètent des facteurs de croissance et des cytokines, et déposent des facteurs de matrice extracellulaire fibrotique tels que le collagène I et la fibronectine. Fibroprolifératif est un terme utilisé pour décrire des tissus riches en myofibroblastes. La prolifération des myofibroblastes et des précurseurs des myofibroblastes est importante dans les tissus fibroprolifératifs ; par conséquent, la compréhension de la prolifération et de la différenciation des myofibroblastes est importante dans le remodelage normal des tissus et dans les pathologies fibroprolifératives, telles que la contracture de Dupuytren, les cicatrices hypertrophiques, la fibrose de l’infarctus du myocarde et la fibrose pulmonaire, entre autres. Le but de l’étude était d’évaluer l’essai de blessure par rayure sur la prolifération et la migration cellulaire du nombre de cellules HSF-PI-16 dans un milieu de culture RPMI + %10 FBS après 24, 28 et 72 h dans les groupes témoins et HEAML.
2. MATÉRIELS ET MÉTHODE
Les parties aériennes d’Achillea millefolium L. ont été collectées ont été collectées en mai 2014, dans des populations poussant dans la province d’Ilam, en Iran. La plante a été identifiée au Département de pharmacognosie, École de pharmacie, Université des sciences médicales de Mashhad, Mashhad, Iran. Un spécimen voucher a été déposé dans l’herbier du collège susmentionné.
Les parties aériennes (feuilles, pédoncules et tiges) d’A. millefolium L. ont été séchées à l’air dans une étuve à 35 à 45 C pendant 5 jours. Les feuilles d’A. millefolium ont été utilisées dans cette étude puisque ces parties sont utilisées en médecine traditionnelle. Les parties susmentionnées ont été broyées en une poudre fine. Un gramme de poudre a été extrait à l’aide de 10 mL d’une solution éthanol/eau distillée (alcool/eau = 8:2, v/v), avec centrifugation à 3000 r/min pendant 15 minutes, puis le surnageant a été collecté. Ce processus a été répété trois fois. Les solvants ont ensuite été éliminés par évaporation. La plante sèche a été coupée et pulvérisée. Trois concentrations d’extraits hydroalcooliques (AEAM ; 2,5 %, 5 % et 10 %) ont été préparées en utilisant le matériel végétal en poudre. Pour cela, 100 g de poudre ont été placés dans 500 mL d’eau distillée bouillante et maintenus à température ambiante pendant 15 min. Les infusions ont été préparées fraîchement juste avant l’administration aux dosages de 0, 1000 ou 2000 µg/kg d’AEAM. L’extraction, le fractionnement et la caractérisation chimique des sous-fractions hydroalcooliques (HEAM) et dichlorométhane (DCM-2) ont été réalisés comme décrit précédemment.
Des fibroblastes cutanés humains normaux ont été obtenus auprès de Science Cell Research Laboratories (Carlsbad, CA, USA) et ont été cultivés dans le milieu Eagle modifié de Dulbecco (DME, Invitrogen Life Technologies, Burlington, ON, Canada) supplémenté avec du sérum bovin fœtal (FBS) à une concentration finale de 10 % (Gibco, Burlington, ON, Canada). Le milieu a été changé trois fois par semaine. Lorsque les cultures ont atteint 90 % de confluence, les cellules ont été détachées des flacons avec une solution de trypsine 0,05 %-acide éthylène diamine tétra acétique (EDTA) 0,1 %, lavées deux fois et remises en suspension dans du milieu DME supplémenté en FBS. Dans chaque expérience, les fibroblastes ont été utilisés entre les passages 4 et 5.
Des fibroblastes cutanés humains (HSF-PI-16) ont été ensemencés uniformément (5,0×104 cellules/puits) dans des macroplaques à 6 puits (chaque puits contenant une seule lamelle couvre-objet) dans un environnement RPMI + %10 FBS, après quoi une rayure (plaie) a été créée sur chaque monocouche confluente en utilisant une pointe de pipette stérile de 1 mL (PipetTipFinder, A division of Lab Procurement Services, LLC, Knoxville, TN, USA) perpendiculaire au fond de la boîte, puis les plaques ont été incubées pendant 24 h supplémentaires à 37 °C/5 % CO2 et cultivées pendant 24 h avec un renouvellement du milieu conditionné toutes les ~6 h. Une rayure de plaie a été réalisée au centre de chaque culture cellulaire confluente à l’aide d’une pointe de pipette stérile de 1 mL et toutes les cellules non adhérentes ont été lavées avec du PBS 1×. Le milieu conditionné a ensuite été réappliqué aux cellules selon le schéma de traitement précédent et les plaques incubées pendant 24 h supplémentaires à 37 °C/5 % CO2. La fixation cellulaire a ensuite été obtenue en utilisant 4 % de formaldéhyde/PBS (Sigma-Aldrich, UK) appliqué pendant 30 min à TA, suivie d’une perméabilisation avec une solution PBS/0,1 % Triton X-100 (Sigma-Aldrich, UK). Les cellules ont ensuite été traitées avec de l’extrait IC50 dilué à 1:1000, puis à l’étape suivante une concentration d’extrait hydroalcoolique IC50 a été ajoutée par rapport aux plaques précédentes. Les cellules fibroblastiques dans les plaques ont ensuite été incubées à 37 °C pendant 12 h avec le milieu conditionné. Pour enregistrer la fermeture de la blessure par rayure, des images ont été capturées aux points temporels 16, 20, 38, 44, 64, 70 et 88 h dans la même position en utilisant un microscope Olympus IX71 (Olympus, Southborough, MA, USA). Chaque puits a été photographié six fois à l’aide d’une microscopie inversée objective (Olympus, UK) et le nombre de cellules ayant migré dans la zone rayée a été compté (en utilisant une zone de rayure standardisée pour chaque image) comme décrit précédemment.
L’analyse cinétique du processus de migration des HSF a été mesurée par microscopie en accéléré. Les cellules ont été ensemencées dans 2 compartiments séparés par un insert en silicone (dispositifs Ibidi). À subconfluence, les inserts ont été retirés, les cellules ont été rincées deux fois avec du PBS pour éliminer les cellules non adhérentes, et le milieu de culture a été remplacé par du milieu frais contenant ou extrait hydroalcoolique de feuilles d’Achillea millefolium (HEAML) (0,19, 0,39, 0,78, 1,56, 3,12, 6,25, a, 12,5 et 25 mg/mL) et supplémenté avec 0,1 % de SVF. La migration cellulaire a été suivie à l’aide d’un microscope inversé en accéléré équipé d’une chambre environnementale à 37 °C sous 5 % de CO2. Le microscope était contrôlé par le logiciel Metamorph. Des images ont été prises toutes les 30 min et enregistrées avec une caméra à couplage de charge pendant 48 h. La migration cellulaire a été quantifiée à l’aide du logiciel Image J.
Toutes les données sont présentées comme moyenne +/− erreur standard de la moyenne (SEM) à partir d’expériences répétées. L’analyse statistique a été réalisée en utilisant le test t de Student ; p<0,05 a été considéré comme statistiquement significatif.
3. RÉSULTATS
3.1. HEAML n’a produit aucun effet secondaire sur les fibroblastes cutanés humains
Nous avons amplifié des fibroblastes cutanés humains en culture et, comme décrit ci-dessus, transfecté les cellules avec des niveaux de HSF-PI-16 (Figures 1 et 2). De manière similaire aux cellules mésenchymateuses, plus de 30 % des fibroblastes transfectés exprimaient IC50, et aussi, nous avons supposé que ces HEAML pourraient contribuer à la transformation des cellules mésenchymateuses HSF-PI-16 dans les plaques mentionnées, et après détermination de la dose et du calendrier optimaux, nous avons ajouté les concentrations mentionnées de HEAML à 24, 48 et 72 h de culture et récolté les cellules pour analyse aux jours 1, 2 et 3. Dans ces conditions, plus de 20 et/ou 30 % des cellules exprimaient IC50 à un temps élevé, par comparaison avec le groupe témoin lorsque les cellules étaient exposées à HSF-PI-16 (Figures 3, 4 et 5). Les cellules HSF-PI-16 exprimaient également différents niveaux de temps et de dose. Les cellules HSF-PI-16 traitées avec HEAML sont devenues rondes à fusiformes et petites, comme confirmé par l’analyse morphologique et l’analyse de culture par diffusion latérale et avant (Figures 1 et 2). Les cellules sont devenues non adhérentes, et ont acquis des marqueurs de surface cellulaire et des caractéristiques morphologiques typiques des cellules immatures et matures de toutes les lignées hématopoïétiques. Ces données sont étayées par l’analyse de viabilité cellulaire. Comme montré dans les Figures 3, 4 et 5, une différence de densité cellulaire a été observée entre les cultures de fibroblastes exposées et non exposées à HEAML. Il y avait également une différence lorsque les cellules étaient exposées pendant 24, 48 et 72 h à soit faible soit élevé mg/ml. Il est toutefois intéressant de noter que l’exposition à HEAML pendant 3 jours a produit un nombre de cellules significativement (p<0,05) plus élevé par rapport à la culture témoin non exposée. Ces résultats démontrent clairement l’absence de tout effet toxique de HEAML sur les fibroblastes cutanés humains.
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3.2. HEAML a favorisé la migration cellulaire de HSF-PI-16 et la fermeture de la rayure et l’observation morphologique
Dans cette étude, la capacité de migration des fibroblastes en présence ou en absence de HEAML a été étudiée en utilisant un essai de blessure par rayure in vitro. La migration de HSF-PI-16 dans une blessure par rayure infligée à travers des cultures confluentes (après 81 de traitements de milieu) était significativement élevée dans les fibroblastes traités par milieu HEAML par rapport au milieu témoin non HEAML (p<0,05). Les fibroblastes ont révélé que les cultures étaient confluentes avant la rayure et que les cellules HSF-PI-16 des groupes HEAML étaient orientées en monocouches parallèles contrairement aux cellules témoins, qui formaient des agrégats en tourbillon de manière similaire aux structures nodulaires en tourbillon démontrées dans les cultures post-confluentes. Par conséquent, les cellules HSF-PI-16 traitées avec le milieu HEAML ont suscité une forte migration dans la blessure par rayure. De plus, les traitements des milieux HSF-PI-16 par HEAML ont suscité une prolifération accrue statistiquement significative (p<0,05) après 24, 48 et 72 h par rapport aux témoins de milieu HSF-PI-16 (Figures 3, 4 et 5). Après 72 h, des augmentations significatives ont été maintenues (Fig 5). Après 48 h et 72 h, le milieu HSF-PI-16 a suscité une prolifération constamment plus élevée que les milieux témoins. Néanmoins, cette différence était statistiquement significative. Des tendances similaires ont été observées dans les fibroblastes cutanés humains. Les cultures RPMI + %10 FBS de HSF-PI-16 ont montré une prolifération statistiquement (p<0,05) élevée lorsqu’elles étaient traitées avec un milieu IC50 par rapport au milieu témoin HSF-PI-16 correspondant (Tableau 1). Globalement, les taux de prolifération étaient plus élevés, et statistiquement significatifs, dans HEAML par rapport aux schémas de milieux des cellules HSF-PI-16 correspondantes. Comme la prolifération cellulaire, la production de facteurs de croissance et la capacité contractile cellulaire étaient favorisées par HEAML, nous avons émis l’hypothèse que HEAML pourrait favoriser la croissance cellulaire et que cet effet stimulant pourrait être transmis d’une génération cellulaire à une autre. Pour aborder cette possibilité, des fibroblastes ont été exposés à HEAML puis cultivés pendant 24 h. Ils ont ensuite été trypsinisés et sous-cultivés pendant 24, 48 et 72 h pour mesurer la croissance cellulaire.
3.3. Évaluation de l’indice HSF-PI-16 par microscope inversé
L’indice cellulaire (CI) mesuré par le système de microscope inversé sans marquage est utilisé comme guide pour surveiller le comportement cellulaire, y compris l’étalement, la prolifération, la viabilité et la morphologie (Tableau 1) (Figures 1 et 2). Les réponses dynamiques dans notre panel de cellules (à différents milieux conditionnés) ont été surveillées en continu après 24 h de synchronisation cellulaire. Les cellules HSF-PI-16 traitées avec des milieux conditionnés HEAML ont produit des augmentations régulières du CI de 24 à 72 h, indiquant un étalement cellulaire HSF-PI-16 accru, une prolifération et des changements de morphologie cellulaire. Le CI global le plus élevé provenait de HSF-PI-16 suivi par les traitements de milieu HEAML dans lesquels les milieux traités suscitaient constamment un CI plus élevé pendant la durée de 72 h. L’ajout de HEAML dans le milieu de culture a influencé la fermeture de la plaie et a donc eu un effet significatif sur la capacité migratoire des fibroblastes en culture. Toutefois, une légère augmentation, d’environ 2,4 % de la fermeture de la plaie, a été observée en présence de HEAML (25 µmg/ml) après 72 h d’incubation, et cette augmentation était significative (Figure 5). Nous avons également observé que les fibroblastes cultivés avec le HEAML dans un milieu RPMI + %10 FBS avaient une densité plus élevée que ceux cultivés seuls. Le jour 3 après le début des cultures, les fibroblastes ont surcroît et formé plusieurs couches de cellules lorsqu’ils étaient cultivés seuls. Pour conclure, afin de comprendre les effets à long terme d’IC50 ou de HEAML et de la culture sur la prolifération des fibroblastes, certaines cultures ont été observées aux 1er, 2e et 3e jours après le lancement des cultures. Comme montré dans la Figure 5, les fibroblastes en co-culture avec IC50 additionnel ont maintenu une prolifération rapide après le jour 3, tandis que ceux des autres cultures ont poussé beaucoup plus lentement. Les fibroblastes du groupe témoin ont présenté une réduction marquée du taux de prolifération après le jour 3. Puisque les fibroblastes dans la culture avec HEAML n’ont pas présenté de réduction du taux de prolifération, la prolifération plus rapide des fibroblastes dans le groupe traité au stade tardif de la co-culture pourrait être causée par un niveau insuffisant de nutrition de base dans le milieu.
4. DISCUSSION
Il s’agit de la première étude in vitro publiée démontrant les effets de HEAML sur la prolifération de fibroblastes obtenus à partir de différentes cultures anatomiques. C’est également la première étude à comparer de tels effets avec le contrôlé disponible commercialement de longue date. Dans cette étude, nous avons utilisé un modèle in vitro de cicatrisation de plaie par rayure et avons pu évaluer les effets de HEAML par rapport au témoin sur des fibroblastes cultivés. L’application d’A. millefolium stimule l’étalement, l’attachement et la prolifération cellulaires de manière dose-dépendante et temps-dépendante au niveau cellulaire et montre également une stimulation dose-dépendante au niveau transcriptionnel pour de nombreux composants de la MEC tels que HSF et ses facteurs de croissance.
Nos résultats ont permis de mettre en évidence une augmentation de la voie anabolique de la MEC, en particulier par stimulation des synthèses de HSF-PI-16. Toutefois, il est important de noter que nos résultats ont également indiqué une augmentation de l’activité et de l’expression de HSF en présence d’extraits d’A. millefolium. L’expression accrue dans les niveaux de MEC de HSF-PI-16 est corrélée à l’augmentation de l’activité des cellules fibroblastiques après 48 h et 72 h d’incubation en présence de HEAML, et sa stimulation devrait conduire à une augmentation de la quantité de composants de la MEC tels que HSF. De plus, nos résultats ont révélé que l’extrait d’A. millefolium stimulait l’expression dans les niveaux HSF-PI-16 de la MEC. Ce HEAML est un stimulateur transcriptionnel des gènes de la MEC comme ceux codant l’activité de type cellules fibroblastiques et est largement responsable de l’augmentation de l’expression de la synthèse des fibroblastes survenant pendant le vieillissement des fibroblastes dermiques. En effet, même si nos extraits ont augmenté la synthèse de HSF-PI-16 in vitro, ils ont également stimulé la synthèse des fibroblastes. Il apparaît que l’équilibre anabolique/catabolique pourrait être en faveur de la synthèse de matériau matriciel malgré la stimulation de l’activité HSF-PI-16. D’autre part, nos extraits ont augmenté les niveaux d’ARNm de HSF.
La prolifération cellulaire et la migration sont des caractéristiques de la division cellulaire. La duplication de l’ADN est l’étape clé de la division cellulaire et elle est contrôlée par différents stades : phases G1/0, G2/M et S du cycle cellulaire. Les phénomènes de prolifération et de migration des cellules fibroblastiques sont principalement gouvernés par les GTPases de la famille Rho comme Rac-1, Rho-A et Cdc-42. Les phases du cycle cellulaire sont coordonnées par l’expression et/ou l’activation de protéines régulatrices, comme les cyclines (p. ex., cyclines A, D et E), les kinases dépendantes des cyclines (Cdk), principalement Cdk-1 et -2, et les inhibiteurs de Cdk. Les cyclines et les kinases dépendantes des cyclines ont également été impliquées dans la formation du cytosquelette d’actine dans les cellules fibroblastiques de mammifères. Ces cellules, acteurs clés du processus de cicatrisation des plaies, sont responsables de la contraction de matrice médiée par les cellules. Par une contraction de leur cytosquelette d’actine, les myofibroblastes au site de la plaie sont capables de réduire la taille initiale de la plaie, contribuant ainsi à la réparation tissulaire.
Une augmentation dose-dépendante du nombre de cellules a été constatée pendant la période de traitement de 48 h avec une augmentation maximale et significative (p<0,05) au niveau de concentration de 25 mg/mL ; par conséquent, une concentration élevée de HEAML (25 mg/mL) a stimulé la prolifération cellulaire et a affiché un effet non cytotoxique sur les cellules HSF-PI-16. Le traitement avec la dose mentionnée de HEAML a présenté une augmentation de plus de 35 % du nombre de cellules à 48 h. Cependant, à une autre concentration, il y avait une différence de prolifération cellulaire entre les cellules des groupes témoins et les cellules traitées avec HEAML. Cette étude soutient plusieurs autres investigations qui ont rapporté que les antioxydants naturels augmentaient le nombre de fibroblastes oraux et de cellules endothéliales et modulaient la croissance des cellules stromales endométriales. Le point final fonctionnel de la division et de la prolifération des cellules fibroblastiques est la migration cellulaire dans la zone blessée. Un modèle établi d’essai de rayure in vitro a été utilisé pour définir quantitativement la migration de fibroblastes cutanés humains dans un modèle cellulaire en monocouche en utilisant l’analyse par logiciel Image J de microscope inversé ; comme le montre la Figure 2, HEAML a augmenté de manière dose-dépendante le taux de migration dans la zone blessée de la chambre jusqu’à la concentration de 3,12 à 25 mg/mL. Le taux de migration cellulaire était similaire à celui observé en présence de feuilles d’A. millefolium, un puissant inducteur de migration cellulaire. Il est donc proposé que HEAML soit non cytotoxique avec une capacité proproliférative à induire la migration de cellules fibroblastiques, lesquels processus étaient cultivés dans un milieu RPMI + %10 FBS impliqué avec du sérum bovin pour la croissance. En parallèle, une étude récente de Smith et al. a rapporté que la culture de MSC murines avec HSF, où chaque type cellulaire était séparé dans une chambre de Boyden modifiée en présence de sérum bovin et équin, augmentait la migration et la prolifération des fibroblastes dermiques. La réponse des fibroblastes dermiques comprenait une expression modifiée de gènes impliqués dans les interactions cellule-matrice. Par conséquent, cela suggère que la migration accrue de ces cellules dans un milieu FBS, stimulée à augmenter la prolifération, était le facteur principal dans le taux accru de fermeture de la blessure par rayure dans chaque chambre de HSF.
Nous avons régulièrement observé une proportion plus élevée de fibroblastes avec des cellules de petite à grande taille et une faible granularité dans les échantillons témoins. Les HSF-PI-16 sont depuis longtemps connus pour produire des clones aux caractéristiques hétérogènes dans des cultures à faible densité. Dans ce contexte, il est intéressant de noter que, dans les cultures à long terme de fibroblastes utilisées comme modèle in vitro du vieillissement cellulaire, une augmentation du potentiel de croissance, un nombre accru de cellules HSF et une production protéique accrue ont été rapportés, ce qui est en accord avec nos résultats. En accord avec les études mentionnées, notre étude a montré qu’un HEAML constant à 3,12 à 25 mg/mL à 48 et 72 h, médié par une croissance favorisée des fibroblastes cutanés, augmentait la migration cellulaire et augmentait la production de facteurs de croissance apparentés. Il est également indiqué que ces comportements cellulaires modifiés étaient hérités par les cellules jusqu’à 2 à 3 jours en culture.
Nos résultats globaux suggèrent donc l’effet bénéfique de HEAML sur les processus de cicatrisation des plaies. D’autre part, la migration des fibroblastes et la contraction de la matrice extracellulaire améliorées par HEAML observées dans notre étude peuvent être expliquées par la forte expression de HSF-PI-16 par les fibroblastes cutanés après exposition à HEAML à 6,25 et 25 mg/ml. Il est important de noter l’effet dose potentiel d’IC50, car le niveau le plus élevé d’expression de HSF-PI-16 a été obtenu à l’intensité HEAML la plus élevée (25 mg/ml) et pour la plus longue période d’exposition (exposition de 48 et 72 h à IC50).
5. CONCLUSION
Nous avons adapté un modèle in vitro établi de cicatrisation de plaie cutanée ; cela avait pour but d’étudier l’utilisation potentielle de HEAML pour les thérapies HSF-PI-16 des plaies cutanées. L’étude a démontré que HSF-PI-16 provoque la fermeture de la plaie dans les essais de rayure en conditions avec sérum et sans sérum, où HSF-PI-16 a initié le processus de cicatrisation de la plaie. Ces études fournissent un nouveau système modèle pour l’étude in vitro de facteurs solubles synthétisés par les cellules qui peuvent influencer la cicatrisation cutanée et donnent un aperçu des mécanismes potentiels par lesquels la transplantation de HEAML est thérapeutique. Pour conclure, la réaction des fibroblastes in vitro joue un rôle significatif dans le processus de guérison. Par conséquent, l’incorporation de HSF dans ce modèle de culture peut être plus représentative de la cicatrisation cutanée in vivo pour l’utilisation de ce type cellulaire. De plus, cette étude démontre clairement que HEAML n’avait pas d’effet cytotoxique sur les fibroblastes cutanés humains ensemencés sur des cultures FBS conductrices de HSF-PI-16. Les fibroblastes non adhéraient bien et proliféraient exponentiellement après diverses périodes d’exposition à IC50. Bien que les cellules aient été trouvées adhérer à la fois aux cultures FBS exposées à HEAML et non exposées, les cultures exposées à HEAML ont produit un nombre plus élevé de cellules viables et une activité comparable des groupes témoins, et/ou par comparaison avec les milieux non exposés. Il est particulièrement intéressant que la viabilité/densité cellulaire ait augmenté avec des périodes d’exposition plus longues (48 et 77 h).