Infusions aqueuses d’Agrimonia eupatoria L. et de Cynara cardunculus L. : comparaison des activités antidiabétiques
Référence : Molecules 2016. — PMC6273028/PMID 27136516 · DOI 10.3390/molecules21050564 Type : etude in vitro · Plante : Aigremoine eupatoire · Propriété → Metabolisme & glycemie Accès : ⭐ libre (open access) → texte intégral traduit Fidélité : traduction intégrale et fidèle du texte des auteurs. Appels [n] omis ; figures/tableaux « [ ] ».
Résumé
Le diabète sucré (DM) est fréquemment diagnostiqué à un moment où les patients souffrent déjà de plusieurs complications cardiovasculaires. Nos données précédemment publiées (Molecules 2015, 20 (11) : 20538-50) sur les propriétés antioxydantes d’Agrimonia eupatoria L. (AE) et de Cynara cardunculus L. (CC) nous ont incités à étendre les preuves disponibles concernant leurs activités protectrices possibles sur des paramètres sélectionnés liés au DM dans un modèle de DM induit par la streptozotocine chez le rat et dans une série d’expériences in vitro. Des rats mâles ont été répartis en quatre groupes : groupe témoin, groupe diabétique non traité, groupes diabétiques traités par AE et CC. Pendant une période de cinq semaines, les changements de la glycémie et du poids corporel ont été suivis. Ensuite, les rats ont été sacrifiés et soumis à l’évaluation des changements de réactivité des aortes et à la mesure de l’activité de la butyrylcholinestérase. Pour compléter le panel d’expériences, l’activité de l’α-glucosidase a été évaluée in vitro. Nos résultats démontrent que les deux extraits testés exercent des activités antidiabétiques similaires. Toutefois, la meilleure activité antioxydante de l’extrait d’A. eupatoria indique son potentiel clinique plus élevé dans la prévention et/ou le traitement adjuvant des complications cardiovasculaires en développement liées au DM et des maladies associées au stress oxydatif.
1. Introduction
Le diabète sucré (DM) est une maladie métabolique chronique ayant d’énormes conséquences sociales, sanitaires et économiques. En conséquence, le DM fait partie des principaux risques mondiaux de mortalité, puisque la maladie entraîne davantage de décès de patients que, par exemple, le VIH/sida. Le DM réduit la capacité de l’organisme à réguler efficacement les niveaux de glucose sanguin, ce qui entraîne le développement de complications liées au diabète. Les complications vasculaires diabétiques (DVC) sont associées aux complications les plus importantes menaçant le pronostic vital qui accompagnent le DM. Il convient de noter qu’environ 25% des patients nouvellement diagnostiqués avec un DM de type 2 souffrent déjà de DVC, ce qui signifie probablement qu’ils avaient un DM non diagnostiqué depuis au moins cinq ans. D’autre part, les patients atteints de DM de type 1 sont fréquemment diagnostiqués en présence d’une acidocétose.
Le traitement du DM, à la fois de type 1 et de type 2, vise à contrôler et à restaurer l’homéostasie du glucose à l’état postprandial comme à jeun. La première étape dans la prise en charge du DM de type 2 est représentée par les modifications du mode de vie et de l’alimentation, qui devraient précéder l’approche pharmacologique. On sait déjà que les niveaux de glucose peuvent être contrôlés par diverses voies, à savoir en réduisant l’absorption du glucose et la production hépatique de glucose, en augmentant la sécrétion pancréatique d’insuline, la sensibilité à l’insuline et l’utilisation périphérique du glucose. Dans ce contexte, plusieurs types d’antidiabétiques ont été utilisés dans la pratique clinique. Les agents antidiabétiques oraux, utilisés comme traitement du DM de type 2, comprennent les biguanides, les sulfonylurées, les thiazolidinediones et les inhibiteurs de l’α-glucosidase. Lorsque le traitement oral échoue, le traitement repose sur l’administration de mimétiques des incrétines et de leurs amplificateurs ainsi que du facteur de croissance analogue à l’insuline, et finalement sur l’application d’insuline humaine recombinante, qui constitue l’option thérapeutique ultime pour le DM de type 1. Outre les effets indésirables, les traitements médicamenteux ne sont pas toujours efficaces pour maintenir l’euglycémie et éviter les complications du DM à un stade tardif, qui sont souvent plus graves dans le DM de type 1.
Bien que l’utilisation connue du traitement végétal du DM remonte déjà à 1550 av. J.-C., la phytothérapie antidiabétique a été considérablement réduite depuis l’introduction des pharmacothérapeutiques modernes. Dans notre étude précédente, nous avons standardisé la teneur en polyphénols d’Agrimonia eupatoria L. et de Cynara cardunculus L. et comparé leurs propriétés antioxydantes. Nous avons montré que les extraits d’A. eupatoria et de C. cardunculus contiennent tous deux près de 8% de polyphénols totaux et sont capables de protéger les cellules et les tissus contre les dommages oxydatifs, en agissant à la fois comme piégeurs de radicaux et en augmentant l’activité antioxydante. Il a également été démontré que les extraits aqueux d’A. eupatoria présentent une activité « de type insuline », ce qui a également motivé notre étude actuelle. Étant donné que les extraits de C. cardunculus diminuent les niveaux de glucose postprandiaux chez les rats diabétiques, nous avons également choisi cette plante pour la comparer à A. eupatoria dans cette étude.
Pour évaluer l’activité antidiabétique potentielle des plantes mentionnées ci-dessus, nous avons déterminé l’effet inhibiteur sur l’α-glucosidase et les niveaux sériques de glucose. Pour compléter le panel d’expériences, l’inhibition des produits terminaux de glycation avancée (AGE), l’activité de la butyrylcholinestérase (BuChE), la réactivité des aortes et la mesure du poids corporel ont été utilisées pour évaluer les propriétés protectrices des plantes contre le développement des DVC.
2. Résultats et discussion
2.1. Inhibition de l’activité de l’α-glucosidase
Les inhibiteurs de l’α-glucosidase ont été spécifiquement développés pour retarder le clivage des oligo- et polysaccharides en monosaccharides, et ainsi réduire l’hyperglycémie postprandiale. Plusieurs plantes sont bien connues pour leurs activités inhibitrices de l’α-glucosidase. En particulier, les flavonoïdes et les terpénoïdes ont été suggérés comme les composés actifs responsables de ces activités inhibitrices. Nos résultats montrent que l’extrait aqueux d’A. eupatoria est un excellent inhibiteur de l’α-glucosidase avec une IC50 = 46,31 ± 8,76 μg/mL, ce qui est en accord avec les données précédemment publiées. Malheureusement, l’extrait aqueux de C. cardunculus testé n’a pas dépassé 50% d’inhibition ; l’IC50 n’a donc pas été déterminée. Deux hypothèses peuvent expliquer l’inefficacité observée de l’extrait. Premièrement, le protocole d’extraction décrit dans la Pharmacopoeia Bohemoslovaca ne nous permet pas d’atteindre une concentration efficace de composés comparable à celle d’autres études. Deuxièmement, on peut également supposer que les composés de l’extrait inhibant l’activité de l’α-glucosidase ne sont pas présents dans les extraits testés.
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Auparavant, les activités antioxydantes et d’inhibition de l’α-glucosidase de composés sélectionnés isolés d’Agrimonia pilosa ont été étudiées. Ici, les composés flavonoïdes et triterpénoïdes se sont montrés des inhibiteurs efficaces de l’α-glucosidase de manière dose-dépendante (IC50 = 1,67-41,67 μg/mL). Cet effet inhibiteur de l’α-glucosidase a également été enregistré au cours de plusieurs expériences menées avec cinq extraits végétaux différents du genre Agrimonia (Agrimonia eupatoria L., Agrimonia procera Wallr., Agrimonia leucantha Kze., Agrimonia japonica (Miq.) Koidz. et Agrimonia coreana Nak.).
D’un point de vue clinique, le principal avantage de l’utilisation quotidienne des inhibiteurs de l’α-glucosidase est une fréquence relativement faible d’hypoglycémie. D’autre part, les effets indésirables des inhibiteurs de l’α-glucosidase (par exemple, acarbose, miglitol) sont des plaintes gastro-intestinales, notamment flatulence et inconfort abdominal, résultant de la malabsorption et, par conséquent, de l’augmentation de la fermentation des glucides. Cependant, il est généralement admis qu’une augmentation lente de la dose améliore la tolérance gastro-intestinale.
2.2. Inhibition de la formation des AGE
Les stratégies thérapeutiques prévenant le développement des DVC comprennent l’administration d’inhibiteurs de la glycation, de la formation des AGE, de l’activation des RAGE (récepteurs des AGE) et d’inhibiteurs de la réticulation des protéines, ainsi que d’agents anti-inflammatoires et antioxydants. La présente expérience a révélé une forte activité antiglycation des deux extraits dans le modèle BSA-GLC (albumine sérique bovine-glucose) (stade précoce de la glycation). L’IC50 d’A. eupatoria a été déterminée à 156,48 ± 70,75 μg/mL et celle de C. cardunculus à 223,61 ± 36,33 μg/mL.
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Divers extraits végétaux riches en polyphénols ont montré des activités antioxydantes et antiglycation comparables à celles d’A. eupatoria et/ou de C. cardunculus. Auparavant, nous avons rapporté une teneur élevée en polyphénols des deux extraits aqueux, ce qui peut représenter la manière dont ces plantes inhibent le développement des DVC.
2.3. Effet d’A. eupatoria et de C. cardunculus sur les niveaux sériques de glucose et les poids corporels
Dans la présente étude, nous avons cherché à savoir si le protocole d’extraction décrit dans la Pharmacopoeia Bohemoslovaca exerce des propriétés antidiabétiques significatives comme cela avait été décrit précédemment. Nous avons montré que l’administration orale quotidienne de l’extrait de C. cardunculus diminuait significativement la glycémie après l’administration de streptozotocine (STZ), mais que l’extrait d’A. eupatoria n’avait pas d’effet antiglycémique. Bien que, dans la présente étude, l’effet d’A. eupatoria (0,2 mg/mL) n’ait pas été significatif, plusieurs études ont prouvé que l’extrait aqueux de la plante (1 mg/mL) exerce une activité « de type insuline » par au moins trois mécanismes potentiels, c’est-à-dire la stimulation du transport du 2-désoxy-glucose, l’oxydation du glucose et l’incorporation du glucose dans le glycogène. Il a également été montré que l’extrait aqueux d’A. eupatoria stimule la sécrétion d’insuline indépendante du glucose dans des cellules β pancréatiques BRIN-BD11. Un examen plus approfondi des mécanismes potentiels a également révélé qu’A. eupatoria réduit la perte de poids, la polydipsie et l’hyperphagie chez les rats diabétiques. Ainsi, nos résultats indiquent que la procédure d’extraction utilisée dans la présente expérience n’est pas suffisante pour atteindre une concentration requise de composés dotée de propriétés antidiabétiques significatives.
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Un autre mécanisme potentiel par lequel C. cardunculus peut être impliqué dans la régulation de la glycémie est représenté par son effet antihyperglycémique. Il a été suggéré que les préparations de C. cardunculus sont capables de réduire les niveaux de glucose sanguin à jeun et postprandiaux chez les rats normaux et obèses ainsi que chez des individus sélectionnés atteints de DM de type 2. De ce point de vue, les remèdes naturels contenant C. cardunculus sont recommandés comme compléments alimentaires pour les patients atteints de DM de type 2. Toutefois, le mécanisme antihyperglycémique exact de C. cardunculus est encore inconnu. On peut émettre l’hypothèse que la teneur élevée en fibres grossières des artichauts améliore la satiété et réduit ainsi indirectement la glycémie.
Les symptômes d’une hyperglycémie marquée comprennent fréquemment polyurie, polydipsie, vision trouble, fatigue, nausées, étourdissements, altération de la cicatrisation des plaies et perte de poids. Comme la perte de poids appartient aux manifestations typiques du DM de type 1, le poids corporel a été mesuré au début de l’expérience ainsi qu’une et cinq semaines après l’administration de STZ. Plusieurs études animales ont remarqué que des extraits végétaux et/ou des composés végétaux isolés sont capables de minimiser la perte de poids corporel dans le modèle de DM induit par la STZ. Néanmoins, dans la présente expérience, l’administration à long terme ni d’A. eupatoria ni de C. cardunculus n’inverse l’influence négative de l’administration de STZ sur le poids corporel.
2.4. Détermination de l’activité de la BuChE
Il est généralement admis que la BuChE est devenue une cible thérapeutique et un marqueur efficace prédisant le développement précoce du DM de type 2. Par conséquent, dans la présente expérience, l’activité de la BuChE a également été déterminée à partir de chaque échantillon de foie. L’activité mesurée la plus basse de la BuChE a été enregistrée dans le groupe diabétique non traité. Le traitement par les deux extraits végétaux testés a significativement augmenté l’activité de la BuChE, mais celle-ci est restée significativement inférieure à celle du groupe témoin.
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Bien que les rôles exacts de la BuChE dans diverses voies physiologiques et pathologiques soient encore restés obscurs, il est déjà bien connu que les patients atteints d’hyperlipidémie, de DM de type 2, de syndrome métabolique et/ou d’obésité présentent des niveaux élevés de BuChE. De même, il a été montré que le diabète à long terme altère le métabolisme lipidique avec une augmentation de l’activité de la BuChE. D’autre part, au cours du DM gestationnel, l’activité de la BuChE est diminuée. En outre, une diminution remarquable de l’activité de la BuChE a été observée dans les rétines de rats diabétiques induits par la STZ et à la suite d’un stress oxydatif. Dans la présente expérience, nous pouvons considérer le DM de type 1 induit par la STZ comme un événement de courte durée et stressant, qui peut conduire à une diminution de l’activité de la BuChE. Il convient de noter que l’augmentation du stress oxydatif et la production d’espèces réactives de l’oxygène sont fréquentes dans le diabète. De ce point de vue, nous pouvons émettre l’hypothèse que les extraits d’A. eupatoria et de C. cardunculus augmentent l’activité de la BuChE chez les rats DM par leur capacité à agir comme agents hypolipidémiants, hypocholestérolémiants, hépatoprotecteurs et antioxydants.
2.5. Réactivité des anneaux aortiques
Les DVC comprennent plusieurs types d’atteintes cardiovasculaires, telles que dysfonction artérielle périphérique, hypertension, dysfonction endothéliale, obstruction des artères coronaires, accident vasculaire cérébral, insuffisance cardiaque, etc. Par conséquent, dans la présente étude, nous avons abordé la question de savoir si les extraits aqueux d’A. eupatoria et/ou de C. cardunculus modulent la réactivité vasculaire. Les résultats de notre étude ont montré que les lésions de l’endothélium causées par l’hyperglycémie aggravaient la capacité dilatatrice des aortes. Cependant, seul le traitement par l’extrait d’A. eupatoria a significativement amélioré la relaxation de l’aorte, tandis que l’administration quotidienne de l’extrait de C. cardunculus n’a eu aucun effet significatif.
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Les effets positifs des extraits testés observés ici peuvent également être liés à la teneur élevée en polyphénols. Ces composés sont bien connus pour leurs activités de relaxation dépendantes de l’endothélium, résultant d’une activité biologique et/ou d’une synthèse accrue de l’oxyde nitrique (NO), ainsi que de la protection du NO contre sa dégradation par les superoxydes. L’épicatéchine, l’un des composés actifs d’A. eupatoria, peut également être responsable de la vasorelaxation dépendante de l’endothélium dans les artères de rats diabétiques induits par la STZ par au moins deux mécanismes : premièrement, en augmentant l’activité biologique du NO et deuxièmement, par l’activation dépendante du NO des canaux K+ sensibles à l’ibériotoxine. Pris ensemble, avec une biodisponibilité accrue du NO, des propriétés antioxydantes, anti-inflammatoires, antidiabétiques et antiglycation, les deux extraits exercent des effets bénéfiques pour prévenir le développement et la progression des DVC. Toutefois, les mécanismes exacts sous-jacents aux effets protecteurs observés restent encore largement inconnus.
3. Matériels et méthodes
3.1. Matériel végétal
Tout au long de l’ensemble de l’expérience, des infusions aqueuses lyophilisées d’Agrimonia eupatoria L. et de Cynara cardunculus L. (toutes deux de Fytopharma, Malacky, Slovaquie) ont été utilisées. Les infusions aqueuses (200 mg/L) ont été préparées selon la Pharmacopoeia Bohemoslovaca 4. Pour l’étude in vivo, les infusions ont été préparées fraîches chaque jour (200 mg/L). Pour les expériences in vitro, les infusions aqueuses ont ensuite été lyophilisées (−53 °C, 0,043 Pa) conformément aux instructions du fabricant (SCANVAC CoolSafe™, LaboGene™, Lynge, Danemark).
3.2. Essai d’inhibition de l’activité de l’α-glucosidase
Brièvement, 0,075 unité d’α-glucosidase (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, États-Unis), issue de Saccharomyces cerevisae, a été prémélangée avec les extraits à diverses concentrations (0,5-1000 μg/mL). Pour démarrer la réaction, 3 mM de p-nitrophényl α-glucopyranoside (pNPG) (Sigma-Aldrich) dans un tampon phosphate de sodium (pH 7,4) ont été ajoutés au mélange comme substrat. La réaction a été incubée à 37 °C pendant 30 min et arrêtée par l’ajout de 2 mL de Na2CO3 0,1 M (Sigma-Aldrich). L’activité de l’α-glucosidase a été déterminée en mesurant la libération de p-nitrophénol à partir du pNPG à 400 nm à l’aide d’un lecteur de plaques (TECAN Infinite® M 200, Männedorf, Suisse). La valeur IC50 a été définie comme la concentration d’inhibiteur de l’α-glucosidase utilisée pour inhiber 50% de son activité dans les conditions de l’essai.
3.3. Inhibition de la formation des AGE (glycation) - essai BSA-glucose
Pour la détermination de l’activité antiglycation, l’essai BSA-GLC a été utilisé. Brièvement, 1 g d’albumine sérique bovine (BSA, Sigma-Aldrich) a été dissous dans 50 mL de tampon phosphate de sodium (pH 7,4), et 10 g de glucose (Sigma-Aldrich) ont été dissous dans 50 mL d’eau distillée. Les solutions d’essai contenaient 0,5 mL d’extrait végétal (à différentes concentrations : 0,5-1000 μg/mL) ou d’eau distillée (témoin), 0,75 mL de solution de BSA et 0,75 mL de solution de glucose. Ces solutions ont été incubées à 37 °C pendant 7 jours. Après l’incubation, l’intensité fluorescente (excitation = 330 nm, émission = 410 nm) a été mesurée sur le lecteur de plaques (TECAN, Infinite® M 200, Männedorf, Suisse). Le pourcentage d’inhibition de la formation des AGE a été calculé à l’aide de l’équation suivante : % inhibition = (1 − fluorescence de la solution avec inhibiteurs/fluorescence de la solution sans inhibiteurs (témoin)) × 100. (1)
3.4. Modèle animal
L’expérience animale a été approuvée par le comité d’éthique de la Faculté de pharmacie, Université Comenius à Bratislava (no 962/10-221). Vingt-quatre rats Wistar mâles (DobráVoda, République slovaque) pesant 278 ± 5,70 g ont été utilisés dans l’expérience. Après une brève période d’acclimatation, les rats ont été répartis aléatoirement en 4 groupes (6 rats par groupe) : (1) animaux sains - groupe témoin ; (2) groupe diabétique non traité (le DM a été induit par administration i.p. (intrapéritonéale) de STZ (Sigma-Aldrich) diluée dans un tampon citrate (pH 4,5) à une dose de 55 mg/kg) ; (3) et (4) animaux diabétiques traités quotidiennement pendant 5 semaines avec les extraits végétaux testés. Avant l’administration de STZ, les niveaux de glucose sanguin et le poids corporel total de tous les animaux ont été mesurés. Les niveaux de glucose sanguin et le poids corporel ont ensuite été mesurés 1 et 5 semaines après l’induction du DM.
Après une période de 5 semaines, tous les rats ont été tués par surdose anesthésique (thiopental, 100 mg/kg i.p., Sigma-Aldrich). Les aortes thoraciques et les foies ont été immédiatement prélevés, rincés à plusieurs reprises dans une solution saline, congelés dans l’azote liquide et conservés à −80 °C jusqu’à l’analyse.
3.5. Préparation des homogénats de foie
Les homogénats de tissu ont été préparés par homogénéisation intensive de 0,5 g de tissu et de 10 mL de PBS potassique froid (pH = 7,4, avec addition de 0,5% de Triton™X (Sigma-Aldrich)). Les homogénats de tissu ont ensuite été centrifugés à 19 872 g pendant 15 min à 4 °C. Le surnageant a ensuite été collecté et utilisé pour l’analyse. La teneur en protéines a été déterminée selon le protocole de Bradford.
3.6. Détermination de l’activité de la BuChE
Pour la détermination de l’activité de la BuChE, la méthode d’Ellman a été utilisée. Brièvement, le mélange réactionnel contenait 1 mL d’acide 5,5′-dithiobis(2-nitrobenzoïque) (DTNB, Sigma-Aldrich), 0,03 mL d’homogénat de tissu provenant des foies et 0,370 mL de tampon phosphate de potassium (pH = 7,4). La réaction s’est déroulée dans une cuvette en silicone (d = 1 cm). Après une période de préincubation de 20 minutes à température ambiante, 0,1 mL de butyrylthiocholine (Sigma-Aldrich) a été ajouté dans la cuvette. L’intensité du produit final, l’acide 5-thio-2-nitrobenzoïque (TNB), a été mesurée spectrophotométriquement à 412 nm (Genesys 6, Thermo, Electro Corp., Loughborough, Royaume-Uni) à intervalles de 5 minutes pendant une période de 25 min. L’activité spécifique de la BeChE a ensuite été calculée à partir de l’équation suivante : nkat = A × Vim × 1000/ε × d × t × Ve (2) et exprimée en nkat/mg de protéines (A - absorbance ; Vim - volume total du mélange d’incubation (1,5 mL) ; ε - coefficient d’absorption molaire du TNB (13,6 mmol−1·cm−1) ; d - épaisseur de la cuvette ; t - temps ; Ve - volume de l’enzyme).
3.7. Isolement et évaluation de la réactivité des anneaux aortiques
Immédiatement après l’euthanasie des animaux, les aortes ont été prélevées, découpées en anneaux et placées entre des fils parallèles dans un bain tissulaire à 37 °C contenant une solution de Krebs-Henseleit gazée avec 95% d’O2 et 5% de CO2. Les anneaux de tous les rats ont été étirés jusqu’à une tension de repos optimale de 1,5 g et stabilisés pendant 60 min. Les anneaux aortiques ont été précontractés avec 10−6 mol/L de phényléphrine (Sigma-Aldrich), afin d’obtenir la réponse maximale des aortes. Ensuite, de l’acétylcholine (Sigma-Aldrich) à une concentration submaximale de 10−6 mol/L a été appliquée. Les changements de tension ont été surveillés et enregistrés isométriquement à l’aide du logiciel S.P.E.L. Advanced Isosys Software (Experimetria Ltd., Budapest, Hongrie). L’effet modulateur des extraits a été exprimé comme un pourcentage maximal de la relaxation (∆%).
3.8. Analyse statistique
Les données des expériences sont présentées comme moyenne ± écart-type (SD). Une analyse de variance à un facteur (ANOVA) suivie du test post-hoc de Tukey-Kramer a été utilisée pour comparer les différences entre les groupes sélectionnés (c’est-à-dire inhibition de l’α-glucosidase et de la formation des AGE, détermination de l’activité de la BuChE et réactivité des anneaux aortiques). Pour comparer les niveaux de glucose et les poids corporels, une analyse de variance à deux facteurs (ANOVA) suivie du test post-hoc de Tukey a été utilisée. La signification a été acceptée à p < 0,05.
4. Conclusions
Les résultats obtenus dans le présent article indiquent que les extraits d’A. eupatoria et de C. cardunculus exercent tous deux plusieurs activités antidiabétiques. Les petites différences dans les résultats obtenus peuvent être liées à la composition phytochimique diverse des extraits testés. A. eupatoria était caractérisée principalement par des procyanidines et des glycosides de flavonols, et C. cardunculus par des dérivés de l’acide chlorogénique. En général, A. eupatoria et C. cardunculus ont démontré de bons effets antiglucosidase, antiglycation et antihyperglycémiques. En outre, les expériences sur des aortes isolées ont montré une amélioration des fonctions dilatatrices vasculaires chez les animaux diabétiques. Toutefois, l’activité antioxydante plus élevée de l’extrait d’A. eupatoria indique son meilleur potentiel clinique dans la prévention et/ou le traitement adjuvant des complications cardiovasculaires en développement liées au diabète et des maladies associées au stress oxydatif. Néanmoins, le protocole de traitement optimal pour une utilisation chez l’humain reste à trouver dans de futures études cliniques.
Remerciements
Nous remercions Lenka Varinská, PhD., pour sa lecture critique de ce manuscrit et pour ses commentaires utiles. Ce travail a été soutenu par l’Agence de subventions du ministère de l’Éducation, de la Science, de la Recherche et du Sport de la République slovaque (subvention no VEGA-1/0299/13, VEGA-1/0646/14, VEGA-1/0048/15).
Disponibilité des échantillons
Des échantillons des extraits aqueux lyophilisés sont disponibles auprès des auteurs.
Contributions des auteurs
Anika Kuczmannová, Miroslava Kameníková, Silvia Fialová, Andrea Balažová et Eva Račanská ont réalisé les expériences. Anika Kuczmannová, Peter Gál et Jaroslav Majerník ont analysé les données. Anika Kuczmannová et Peter Gál ont rédigé le manuscrit. Pavel Mučaji et Milan Nagy ont participé à la conception de l’étude et ont fourni un soutien financier. Tous les auteurs ont lu et approuvé la version finale du manuscrit.
Conflits d’intérêts
Les auteurs déclarent n’avoir aucun conflit d’intérêts.