Effets bénéfiques d’Alchemilla vulgaris dans un modèle de syndrome des ovaires polykystiques induit par la DHEA chez le rat
Référence : Reproductive Sciences 2025. — PMCID PMC12270970 · DOI 10.1007/s43032-025-01885-9 Type : etude in vivo · Plante : Alchemille commune · Propriété → Gynecologie & cycle Accès : ⭐ libre (open access) → texte intégral traduit Fidélité : traduction intégrale et fidèle du texte des auteurs. Appels [n] omis ; figures/tableaux « [ ] ».
Résumé
Alchemilla vulgaris a traditionnellement été utilisée pour traiter les maladies gynécologiques. Les effets anti-inflammatoires et vasorelaxants de l’extrait d’A. vulgaris (AVE) ont été rapportés dans des études antérieures. Cette étude visait à étudier les effets d’A. vulgaris sur le SOPK, l’un des troubles métaboliques les plus fréquents chez les femmes adultes en âge de procréer, accompagné d’inflammation et de dysfonction endothéliale vasculaire, dans un modèle animal expérimental. Trois groupes de rates Wistar femelles prépubères ont été établis : groupes SOPK, témoin et SOPK + AVE. La déhydroépiandrostérone (DHEA) a été administrée par voie sous-cutanée pendant 35 jours aux groupes SOPK et SOPK + AVE. Les rates du groupe SOPK + AVE ont reçu par voie orale de l’AVE (50 mg/100 g pc/jour) pendant 35 jours. La pression artérielle systémique, la fonction endothéliale vasculaire, la morphologie ovarienne et les taux de biomarqueurs endocriniens ont été mesurés à la fin de l’expérience. Les taux de TNF-α ont également été évalués dans l’aorte thoracique et les ovaires. Des déséquilibres hormonaux, des changements morphologiques ovariens et une dysfonction endothéliale ont été observés dans le groupe SOPK, et sont revenus aux valeurs des témoins après le traitement par AVE. En outre, AVE a atténué les taux aortiques et ovariens de TNF-α dans le groupe SOPK. Notre étude suggère qu’AVE pourrait avoir des effets bénéfiques dans le traitement du SOPK en raison de ses propriétés anti-inflammatoires et vasoprotectrices. [ ]
Introduction
Alchemilla est un genre de plantes (herbes) de la famille des Rosaceae. Le genre Alchemilla L. est rapporté comme comprenant 1 000 espèces ayant des usages médicinaux traditionnels. De nombreuses études sur l’utilisation traditionnelle des espèces d’Alchemilla indiquent divers effets pharmacologiques médicinaux, tels que des effets antioxydants, antimicrobiens et anti-inflammatoires, ainsi que leur utilisation dans le traitement des maladies endocriniennes et gynécologiques. En Turquie, les espèces d’Alchemilla sont traditionnellement utilisées comme diurétiques et laxatifs. Cependant, Alchemilla vulgaris, une espèce bien connue du genre Alchemilla, est largement utilisée en médecine populaire pour le traitement de la dysménorrhée, de la ménorragie et des plaintes ménopausiques dans divers pays. Dans la médecine populaire palestinienne, A. vulgaris est également utilisée pour le traitement de l’infertilité féminine. Bien qu’A. vulgaris soit largement utilisée comme remède populaire pour les déséquilibres hormonaux féminins et les maladies gynécologiques dans de nombreux pays, à notre connaissance, aucune étude n’a encore rapporté son utilisation pour le traitement du syndrome des ovaires polykystiques (SOPK).
Les efforts visant à établir les traditions de phytomédecine dans la découverte moderne de médicaments ont augmenté ces dernières années. Peu d’études précliniques ont examiné les effets de plantes traditionnelles dans des modèles animaux. Dans l’une de ces études, Küpeli Akkol et al. ont démontré les effets bénéfiques des extraits d’A. mollis et d’A. persica dans un modèle d’endométriose chez le rat. Selon leurs résultats, les effets bénéfiques de ces espèces d’Alchemilla pourraient être en partie attribués à leurs activités antioxydantes et anti-inflammatoires. Takır S et al. ont étudié les effets de l’extrait d’A. vulgaris sur la fonction vasculaire chez des rats hypertendus induits par L-NAME, démontrant que l’extrait d’A. vulgaris provoquait des effets vasorelaxants et abaissant la pression artérielle chez ces rats. Ces effets peuvent contribuer à la vasoprotection de l’endothélium vasculaire, qui pourrait être altéré chez les patientes atteintes de SOPK.
Le syndrome des ovaires polykystiques est une endocrinopathie influencée par des facteurs environnementaux, génétiques et hormonaux. La physiopathologie du SOPK comprend une dysfonction ovarienne, une insulinorésistance, une hyperinsulinémie, un hyperandrogénisme, une production anormale de gonadotrophines et une dysfonction hypothalamo-hypophysaire. Des études antérieures ont montré que les femmes atteintes de SOPK présentent un risque accru d’inflammation chronique de bas grade, d’insulinorésistance, de syndrome métabolique, de diabète de type 2 et de dyslipidémie. Selon Christakou et Diamanti-Kandarakis, ces facteurs augmentent les risques d’hypertension, d’athérosclérose et de dysfonction endothéliale. L’insulinorésistance et l’hyperandrogénisme sont des facteurs clés associés à la dysfonction endothéliale vasculaire et à l’athérosclérose chez les patientes atteintes de SOPK. En outre, la mesure de l’excrétion urinaire d’albumine chez les femmes atteintes de SOPK est associée aux facteurs de risque cardiovasculaire et peut fournir des données cliniquement utiles pour les événements cardiovasculaires indésirables.
Le SOPK humain a été modélisé dans divers modèles de rats au moyen de méthodes hormonales, de manipulations physiologiques et de modifications génétiques, afin de reproduire de nombreux phénotypes du trouble humain, notamment l’hyperandrogénisme, l’élévation de la LH, les ovaires polykystiques et l’insulinorésistance. Les méthodes hormonales utilisant des androgènes et leurs dérivés sont largement utilisées pour étudier les altérations des biomarqueurs endocriniens et de la morphologie ovarienne dans le SOPK. Le modèle de SOPK chez le rat induit par 5 à 6 semaines de traitement par déhydroépiandrostérone (DHEA) mime plusieurs caractéristiques du SOPK humain, telles que l’hyperandrogénisme, l’acyclicité, la maturation anormale des follicules ovariens et l’anovulation. Il a été démontré que les taux sériques d’androgènes, d’œstrogènes et d’hormone lutéinisante (LH) augmentent dans ce modèle animal. Des changements endocriniens et métaboliques ont également été observés dans ce modèle dans des études antérieures. En outre, certaines études ont démontré une dysfonction endothéliale vasculaire dans ce modèle animal. En raison de ces avantages, le modèle de SOPK induit par la DHEA chez le rat a été utilisé dans la présente étude.
Cette étude visait à étudier les effets de l’extrait d’A. vulgaris chez des animaux présentant un SOPK induit par la DHEA, sur la base de son utilisation ethnobotanique au sein du genre Alchemilla L. pour le traitement des maladies gynécologiques, et de recherches antérieures démontrant l’effet vasoprotecteur de la plante dans des modèles de rats hypertendus. Pour explorer les mécanismes d’AVE dans le modèle de SOPK induit par la DHEA, la fonction endothéliale vasculaire a été examinée en évaluant la fonction vasculaire et les taux de synthase endothéliale de l’oxyde nitrique (eNOS) dans l’aorte thoracique. La fonction rénale a également été évaluée en relation avec la fonction vasculaire. De plus, la pression artérielle systémique (PAS), l’insuline, la leptine, l’hormone anti-müllérienne (AMH), la dihydrotestostérone (DHT), les œstrogènes, le glucose et les taux de cholestérol dans le sérum et le tissu ovarien ont été analysés afin de déterminer les effets d’AVE sur les perturbations métaboliques et reproductives.
Matériels et méthodes
Matériel végétal et préparation de l’extrait
Des plantes d’Alchemilla vulgaris L. au stade de floraison ont été récoltées sur le mont Zigana, près de Trabzon, Turquie, le 06.08.2023 (à une altitude de 1750-1900 m). L’identification taxonomique des matériels végétaux a été confirmée par H. Aşkın Akpulat, taxonomiste végétal senior du Département de biologie, Université Cumhuriyet, Sivas, Turquie. Afin d’éviter de nuire à cette espèce en raison de sa nature unique, la collecte a été effectuée avec précaution, en utilisant des matériels limités. Un échantillon témoin a été déposé à l’Herbier du Département de biologie, Université Cumhuriyet, Sivas, Turquie (CUFH-Voucher no. : AA 8034). Pour préparer une infusion de la plante, 5 g d’herbe séchée ont été ajoutés à 1000 mL d’eau chaude et laissés pendant 10 min. Après filtration, l’extrait AVE a été administré par voie orale aux rats à une dose quotidienne de 50 mg/100 g de poids corporel.
Modèle animal
Trente rates albinos Wistar femelles (âgées de 3 semaines) ont été obtenues auprès de l’Université de Kocaeli, Centre de recherche et d’application en médecine expérimentale (Kocaeli, Turquie) et hébergées dans des conditions standard de laboratoire (température ambiante 22 ± 2 °C, cycle lumière/obscurité de 12 h/12 h) avec un libre accès à des granulés alimentaires et à l’eau du robinet. Cette étude a été approuvée par le Comité d’éthique de la recherche animale de l’Université de Kocaeli (numéro de projet : KOU HADYEK 4/10-2016, Kocaeli, Turquie), conformément aux règlements du Comité d’éthique de la recherche animale en Turquie (numéro 26220, 6 juillet 2006).
Les rates ont été réparties au hasard en trois groupes (n = 10 par groupe) : groupes témoin, SOPK et SOPK + AVE. La DHEA a été dissoute dans de l’huile de sésame et administrée par voie sous-cutanée à une dose quotidienne de 6 mg/100 mg/jour pendant 35 jours aux groupes SOPK et SOPK + AVE, à un volume de 0,2 mL/100 g de poids corporel.
Des expériences préliminaires ont été menées pour évaluer les effets de la solution véhicule sur les données pharmacologiques et biochimiques. Aucune différence statistique n’a été trouvée entre les traitements par huile de sésame et solution saline chez les animaux témoins. Par conséquent, les animaux du groupe témoin n’ont reçu aucun traitement (données non présentées).
L’extrait d’Alchemilla vulgaris (AVE) a été préparé quotidiennement et administré par voie orale pendant 35 jours au groupe SOPK + AVE. La dose d’AVE a été sélectionnée sur la base d’études animales antérieures examinant les effets vasculaires et gynécologiques des espèces d’Alchemilla. Alchemilla vulgaris a une longue histoire d’utilisation en médecine traditionnelle pour la santé reproductive féminine. Les évaluations précliniques de sécurité ont rapporté qu’AVE est bien toléré, sans toxicité connue même à fortes doses. La dose thérapeutique efficace varie selon la méthode d’extraction, la voie d’administration et la cible pharmacologique ; toutefois, des doses orales comprises entre 50 et 500 mg/kg/jour sont couramment utilisées dans les modèles de rongeurs. En conséquence, une dose orale de 500 mg/kg/jour a été sélectionnée dans la présente étude afin d’assurer à la fois la sécurité et une activité biologique suffisante. À la fin de la période de SOPK de 35 jours, le poids corporel et la pression artérielle systémique des rates ont été mesurés pour confirmer l’induction du modèle expérimental de SOPK comme décrit dans notre étude antérieure. Des échantillons de sang et de tissus ont ensuite été prélevés sous anesthésie kétamine/xylazine (90 mg/kg/10 mg/kg) pour les analyses biochimiques et pharmacologiques.
Enregistrement de la pression artérielle
Sous anesthésie à l’éther, des cathéters en polyéthylène (PE 10 attaché à PE50) ont été insérés dans l’artère fémorale, les autres extrémités des cathéters (remplies de solution saline héparinée) étant passées par voie sous-cutanée et extériorisées à la surface dorsale du cou, où elles ont été suturées à la peau. Les rats ont été autorisés à récupérer de l’anesthésie pendant 2 h, après quoi le cathéter de l’artère fémorale a été utilisé pour une surveillance continue de la pression artérielle pendant 60 min chez des rats libres de leurs mouvements. La pression artérielle systolique (PAS) et la pression artérielle diastolique (PAD) ont été enregistrées via un ordinateur à l’aide du système Biopac MP 36 (St. Barbara, CA, États-Unis). La pression artérielle moyenne (PAM) a été calculée à l’aide de la formule PAM = PAD + (PAS - PAD)/3.
Études en bain d’organe
Après la mesure de la PAS, les rats ont été sacrifiés et les tissus d’aorte thoracique ont été excisés afin d’évaluer la fonction endothéliale vasculaire, comme décrit précédemment. Les anneaux d’aorte thoracique ont été préparés à une longueur d’environ 5 mm et placés immédiatement dans une solution de Krebs. Les anneaux ont été montés dans des chambres de bain d’organe de 20 mL contenant une solution de Krebs, aérée avec du carbogène (95 % O2 et 5 % CO2), et maintenue à 37 °C et pH 7,4. La tension isométrique de chaque anneau a été mesurée à l’aide d’un transducteur force-déplacement (MAY-COM FDT 10 A, Commat Iletisim). Un système d’acquisition de données à transducteur à quatre canaux a été utilisé pour enregistrer les forces isométriques des anneaux (MP30B-CE ; Biopac Systems, Santa Barbara, CA, États-Unis) et les analyser avec le logiciel BSL Pro 3.7 (Biopac Systems). Les préparations d’aorte thoracique ont été laissées s’équilibrer à une tension de repos de 1 g pendant 1 h, les anneaux étant lavés avec une solution de Krebs toutes les 15 min afin de maintenir la tension de repos à 1 g tout au long de l’expérience.
Pour vérifier la viabilité des préparations, les aortes thoraciques ont été contractées avec 80 mM de chlorure de potassium (KCl). Les tissus ont ensuite été lavés et précontractés avec une concentration submaximale de phényléphrine (3.10^-6 M-10^-5 M). Les réponses relaxantes au carbachol (10^-8-10^-5 M), au nitroprussiate de sodium (SNP ; 10^-9-10^-4 M) ou à la papavérine (10^-4 M) ont été obtenues à partir d’anneaux aortiques précontractés. Après l’achèvement de chaque courbe concentration-réponse, les tissus ont été rincés avec un tampon frais et autorisés à revenir à la tension basale pendant 30 min.
Mesure des hormones sériques et du TNFα
À la fin de la période d’administration de 35 jours de DHEA et/ou d’AVE, des échantillons de sang ont été prélevés et immédiatement centrifugés à 4000 rpm pendant 15 min. Les échantillons de sérum séparés ont été conservés à -80 °C jusqu’à une analyse ultérieure. Les concentrations sériques de TNF-α, glucose, insuline, leptine, cholestérol, dihydrotestostérone (DHT), estradiol et hormone anti-müllérienne (AMH) ont été mesurées afin d’évaluer les effets du SOPK au moyen d’essais immuno-enzymatiques (Sunbred, district de Baashan, Shangai), conformément aux instructions du fabricant. Les échantillons ont été analysés à l’aide d’un lecteur microelisa (Alisei Quality System Seac, société RADIN).
Mesure de l’excrétion urinaire de protéines et d’albumine
Les échantillons d’urine des rats (n = 5/groupe) ont été recueillis dans des cages métaboliques en plastique pendant 24 h. Les niveaux d’excrétion urinaire d’albumine et de protéines ont été mesurés à l’aide d’un lecteur ELISA (Abbott Architecht c16000).
Immunohistochimie ovarienne et vasculaire
Coloration à l’hématoxyline et à l’éosine (H&E)
L’évaluation de l’architecture ovarienne et du nombre de follicules a été réalisée à l’aide de coupes colorées à l’hématoxyline-éosine (H&E). La coloration H&E a été appliquée à chaque dixième coupe de l’ovaire, chaque coupe étant séparée de la suivante par environ 50-60 μm. Tous les types folliculaires ont été classés et comptés comme décrit précédemment. Toutes les coupes ont été évaluées à l’aide d’un microscope optique droit à champ clair (Leica DM 1000) et documentées à l’aide d’une caméra numérique attachée (Leica DMC 2900).
Immunohistochimie eNOS et TNF-α
Les échantillons de tissus aortiques et ovariens ont été déparaffinés à l’aide de toluène et réhydratés avec une série descendante de solutions d’éthanol. Après récupération antigénique induite par la chaleur, les coupes ont été rincées avec une solution saline tamponnée au Tris (TBS). L’activité peroxydase endogène a été inhibée en traitant les échantillons avec une solution de peroxyde d’hydrogène à 3 %. Les échantillons ont ensuite été lavés deux fois avec du TBS et bloqués avec une solution de blocage protéique. Ensuite, les coupes ont été incubées pendant la nuit avec un anticorps polyclonal de lapin dirigé contre TNF-α (ab183896, Abcam ; dilution 1:750). Les coupes aortiques ont été marquées avec un anticorps primaire monoclonal de souris anti-eNOS (ab76198, Abcam ; dilution 1:1000) pendant la nuit. Après incubation avec les anticorps primaires, les spécimens ont été immergés dans TBS-Tween 20 (TBS-T) et incubés avec des anticorps secondaires conjugués à la HRP pendant 15 min à température ambiante. Après lavage avec du PBS, les coupes ont été incubées avec du DAB et contre-colorées avec l’hématoxyline de Mayer. Les échantillons ont été analysés au microscope optique (Leica DM 1000) équipé d’une caméra numérique (Leica DMC 2900). L’intensité d’expression de TNF-α et d’eNOS a été quantifiée à l’aide du logiciel ImageJ.
Médicaments et solutions
La DHEA, le chlorhydrate de phényléphrine, le carbachol, le SNP et le chlorhydrate de papavérine ont été obtenus auprès de Sigma-Aldrich Co. (St. Louis, MO, États-Unis). La DHEA a été dissoute dans de l’huile de sésame. Tous les médicaments, à l’exception de la DHEA, ont été fraîchement préparés dans de l’eau distillée et conservés sur glace pendant les expériences. Pour les études en bain d’organe, la solution de Krebs a été utilisée avec la composition ionique suivante (mM) : NaCl 118, KCl 4,71, MgCl2 1,05, NaH2PO4 1,33, NaHCO3 25, CaCl2 2,7 et glucose 5,6. Dans la solution riche en K+, NaCl a été remplacé par des quantités équimolaires de KCl. Un extrait aqueux d’A. vulgaris a été utilisé à une concentration de 5 mg/mL.
Analyse statistique
Toutes les données sont présentées sous forme de moyenne ± erreur standard de la moyenne (SEM). La pression artérielle moyenne (PAM) a été évaluée à l’aide du test de Friedman, suivi du post-test de comparaison multiple de Dunn et d’une analyse de variance à un facteur (ANOVA). Les différences dans les mesures répétées au sein du groupe et entre les groupes aux 5e, 15e, 30e et 60e minutes ont été analysées à l’aide du test de comparaison multiple de Bonferroni. Dans les études en bain d’organe, les réponses relaxantes au carbachol et au SNP ont été exprimées en pourcentage de la précontraction induite par la phényléphrine. Les différences entre les groupes expérimentaux ont été déterminées à l’aide d’une ANOVA à un facteur suivie du test post hoc de Tukey. Les scores d’immunoréactivité ont été évalués à l’aide du test de Kruskal-Wallis, suivi du test de comparaison multiple de Dunn. La significativité statistique a été fixée à p < 0,05.
Résultats
Induction du modèle de SOPK chez le rat et amélioration des phénotypes
L’induction du SOPK a été confirmée par la mesure des poids corporels et des changements hormonaux dans le modèle de SOPK chez le rat induit par la DHEA. Le poids corporel moyen du groupe SOPK était significativement plus élevé que celui du groupe témoin (p < 0,05). Les taux sériques de DHT et d’AMH étaient augmentés, tandis que les taux d’E2 étaient diminués dans le groupe SOPK par rapport aux témoins (p < 0,05). Les taux sériques d’insuline, de leptine et de cholestérol ont été mesurés pour évaluer les phénotypes métaboliques du modèle. L’administration de DHEA a induit des augmentations significatives des paramètres métaboliques, reflétant la dysfonction métabolique observée dans le SOPK humain (p < 0,05). Les changements hormonaux observés et l’élévation du poids corporel dans le groupe SOPK ont indiqué l’établissement réussi du modèle de SOPK après une injection de DHEA de 35 jours. En plus de ces changements métaboliques et endocriniens, la morphologie ovarienne polykystique a été vérifiée par examen histologique. Les coupes ovariennes colorées H&E ont révélé de multiples follicules atrétiques, des nombres réduits de follicules de Graaf et de corps jaune, et une folliculogenèse altérée. Ces constatations histologiques sont cohérentes avec les changements ovariens de type polykystique précédemment décrits dans les modèles de SOPK induit par la DHEA. [ ] [ ]
Le traitement par AVE a ramené le poids corporel moyen et les taux sériques de DHT, d’AMH et d’E2 dans le groupe SOPK + AVE à des niveaux similaires à ceux observés dans le groupe témoin. En outre, le groupe SOPK + AVE a présenté des taux sériques significativement diminués d’insuline, de leptine et de cholestérol (p < 0,05) par rapport aux animaux SOPK.
Excrétion urinaire de protéines et d’albumine
Les effets du SOPK et du traitement par AVE sur la fonction rénale ont été évalués en mesurant l’excrétion urinaire d’albumine et de protéines. Les taux d’albumine urinaire étaient similaires dans tous les groupes. Toutefois, les taux de protéines urinaires étaient élevés dans le groupe SOPK et sont revenus aux niveaux témoins après le traitement par AVE (p < 0,05). [ ]
PAS et réactivité vasculaire
Il n’y avait pas de différence significative dans les mesures répétées de PAS entre les groupes. Les différences dans les mesures répétées au sein du groupe et entre les groupes aux 5e, 15e, 30e et 60e minutes étaient également similaires. Les réponses contractiles à 80 mM de KCl et la précontraction avec la phényléphrine (10^-5-3.10^-6 M) des anneaux étaient comparables dans tous les groupes (données non présentées). Les réponses relaxantes ont été évaluées dans des anneaux d’aorte thoracique précontractés. La relaxation dépendante de l’endothélium en réponse au carbachol était significativement diminuée dans le groupe SOPK (p < 0,05). Cependant, cette altération a été ramenée aux niveaux témoins après le traitement par AVE. Les réponses relaxantes indépendantes de l’endothélium au SNP étaient similaires dans tous les groupes. De plus, il n’y avait pas de différences significatives dans les réponses relaxantes à la papavérine entre les groupes (données non présentées). [ ] [ ]
TNF-α, un biomarqueur inflammatoire
Les taux sériques de TNF-α, un indicateur de l’inflammation, étaient significativement augmentés dans le groupe SOPK par rapport au groupe témoin (p < 0,05). Après le traitement par AVE, ces taux élevés de TNF-α ont été normalisés à des valeurs comparables à celles du groupe témoin.
Immunohistochimie ovarienne et vasculaire
Coloration H&E
Les coupes ovariennes du groupe témoin présentaient une morphologie ovarienne normale, montrant tous les types de follicules à différents stades de la folliculogenèse ainsi que la présence du corps jaune, qui est un signe d’ovulation. Les ovocytes et leur zone pellucide environnante ne présentaient aucune dégénérescence. Cependant, le groupe SOPK présentait de nombreux follicules atrétiques. Des cellules de la granulosa à noyaux pycnotiques ont été observées dans l’antre de ces follicules atrétiques. Dans le groupe traité par AVE, la morphologie ovarienne s’est améliorée pour ressembler à celle du groupe témoin, comme l’indiquent un nombre accru de corps jaune et de follicules de Graaf, et un nombre diminué de follicules atrétiques. De plus, l’ovocyte et la zone pellucide environnante des follicules de Graaf étaient normaux et intacts. [ ]
Dans les coupes colorées H&E, les nombres de follicules ont été analysés afin de déterminer le pool folliculaire. Par rapport au groupe témoin, le nombre de follicules primordiaux, primaires unilaminaires, primaires multilaminaires, de follicules de Graaf et de corps jaune a diminué dans le groupe SOPK mais a augmenté après le traitement par AVE. Alors que le nombre de follicules secondaires est resté inchangé dans tous les groupes, le nombre de follicules atrétiques a augmenté dans le groupe SOPK par rapport au groupe témoin et a diminué dans le groupe SOPK + AVE par rapport au groupe SOPK. Aucune différence significative n’a été observée entre les groupes témoin et SOPK + AVE en ce qui concerne les follicules secondaires, les follicules atrétiques et les corps jaunes. La diminution des follicules atrétiques, ainsi que l’augmentation du nombre de follicules de Graaf et de corps jaunes dans le groupe SOPK + AVE, suggèrent que le traitement par AVE a amélioré l’altération de la folliculogenèse induite par le SOPK. [ ]
Les coupes d’aorte thoracique du groupe témoin présentaient une morphologie saine et une épaisseur normale des couches intima, média et adventice. En revanche, le groupe SOPK montrait une média irrégulière, un détachement entre la média et l’adventice, une infiltration leucocytaire et une hémorragie dans l’adventice par rapport au groupe témoin. Dans le groupe traité SOPK + AVE, la morphologie et l’architecture aortiques ont été restaurées à des niveaux comparables à ceux du groupe témoin. [ ]
Immunoréactivité TNF-α et eNOS
Dans l’aorte et l’ovaire, les intensités de coloration immunohistochimique de TNF-α et d’eNOS ont été quantifiées à l’aide du logiciel ImageJ. Dans les coupes de tissu aortique, l’expression de TNF-α et d’eNOS dans les groupes SOPK et SOPK + AVE présentait des différences statistiquement significatives par rapport au groupe témoin. Dans le groupe SOPK + AVE, les niveaux d’expression de TNF-α ont diminué, tandis que les niveaux d’expression d’eNOS ont augmenté par rapport à ceux du groupe SOPK. Dans les coupes ovariennes, les niveaux d’expression de TNF-α étaient plus élevés dans les groupes SOPK et SOPK + AVE par rapport au groupe témoin. Cependant, le traitement par AVE a significativement réduit l’expression de TNF-α par rapport au groupe SOPK. [ ] [ ]
Discussion
Dans la présente étude, les animaux présentant un SOPK induit par la DHEA ont montré une dysfonction endothéliale vasculaire, des déséquilibres hormonaux et des changements morphologiques ovariens, qui se sont tous améliorés après le traitement par AVE. De plus, AVE a réduit les taux ovariens et aortiques de TNF-α, qui étaient élevés dans le groupe SOPK. Nos résultats suggèrent que les effets anti-inflammatoires et vasoprotecteurs d’AVE pourraient être bénéfiques dans le traitement du SOPK.
Plusieurs modèles animaux ont été développés pour stimuler les changements hormonaux et ovariens chez les patientes atteintes de SOPK. Dans cette étude, un modèle de rat de SOPK induit par la DHEA a été utilisé pour reproduire des caractéristiques ovariennes et métaboliques similaires à celles observées chez les femmes atteintes de SOPK. Le modèle a été confirmé en mesurant les biomarqueurs métaboliques et endocriniens dans le sang. Des taux élevés de DHT et d’AMH, ainsi que des taux diminués d’E2, ont été observés comme changements hormonaux, tandis que des taux accrus d’insuline, de leptine et de cholestérol ont été notés comme changements métaboliques dans le groupe SOPK. Une augmentation du poids corporel moyen a également été observée dans le groupe SOPK. Ces changements reflètent les phénotypes métaboliques et endocriniens du SOPK chez l’humain. En outre, les constatations histologiques, telles qu’une diminution des follicules de Graaf et des corps jaunes et une augmentation des follicules kystiques, secondaires et atrétiques, ont davantage validé le modèle.
Alchemilla, un genre d’herbes de la famille des Rosaceae, a été traditionnellement utilisé comme médecine populaire dans certains pays. A. vulgaris, une espèce bien connue du genre Alchemilla, a été largement utilisée pour le traitement d’affections gynécologiques telles que la dysménorrhée, la ménorragie et les plaintes ménopausiques, traditionnellement. Elle a également été utilisée en médecine populaire pour l’infertilité féminine. Malgré son utilisation traditionnelle répandue, il existe peu d’études examinant les mécanismes d’action du genre Alchemilla dans des modèles expérimentaux de maladies gynécologiques. Küpeli Akkol et al. ont démontré que les extraits d’A. mollis et d’A. persica ont des effets bénéfiques dans un modèle animal d’endométriose, rapportant une réduction de la sévérité des lésions endométriosiques après traitement. De plus, ils ont constaté que les taux de TNF-α et d’IL-6 étaient réduits dans le groupe endométriose traité par Alchemilla. Une relation entre des taux élevés de cytokines pro-inflammatoires et la dysfonction ovarienne a été démontrée dans un modèle de SOPK chez le rat. Des taux élevés de TNF-α jouent un rôle clé dans le développement du SOPK. Dans notre étude antérieure, nous avons montré que le traitement par étanercept, un médicament anti-TNF-α, présentait des effets bénéfiques dans le SOPK. L’effet bénéfique de l’étanercept a été en partie attribué à une diminution de l’expression ovarienne de TNF-α chez les rats traités. De même, dans la présente étude, l’AVE pourrait avoir exercé des effets bénéfiques en inversant l’inflammation observée dans le SOPK. En outre, l’amélioration de la morphologie ovarienne après le traitement par AVE pourrait être due à ses propriétés anti-inflammatoires.
Des études antérieures ont documenté une relation entre le SOPK et la dysfonction endothéliale vasculaire. Il a été montré que les femmes atteintes de SOPK présentent une inflammation endothéliale, une prolifération des cellules endothéliales et des troubles de la coagulation, qui contribuent tous à la dysfonction endothéliale puis à l’athérosclérose. En outre, les patientes atteintes de SOPK présentent souvent des anomalies hormonales, notamment un hyperandrogénisme et des taux élevés d’insuline, qui peuvent contribuer indépendamment à la dysfonction endothéliale vasculaire et exacerber le risque de maladie cardiovasculaire. Plusieurs études ont trouvé une corrélation entre l’hyperandrogénémie, l’insulinorésistance et la dysfonction endothéliale chez les patientes atteintes de SOPK. L’inflammation chronique a également été rapportée comme un autre facteur contribuant à la dysfonction endothéliale vasculaire. Conformément à nos études et aux études antérieures, parallèlement aux altérations métaboliques et à la dysfonction endothéliale vasculaire, un niveau accru de TNF-α dans le sérum et le tissu vasculaire a été observé dans le groupe SOPK. Les changements métaboliques et vasculaires liés au SOPK ont été améliorés après le traitement par AVE. Les effets anti-inflammatoires et vasorelaxants d’AVE pourraient avoir prévenu de manière synergique les changements causés par le SOPK.
Les extraits de diverses espèces végétales du genre Alchemilla ont été traditionnellement utilisés pour le traitement de l’hypertension. Les effets cardiovasculaires d’un nombre limité d’espèces du genre Alchemilla ont également été étudiés dans certaines études in vitro. Dans une étude antérieure, il a été montré qu’un extrait d’A. viridiflora présentait un effet inhibiteur in vitro sur l’enzyme de conversion de l’angiotensine, un contributeur majeur à l’hypertension. Dans une autre étude in vitro, les effets de l’extrait d’A. vulgaris sur la fonction vasculaire ont été étudiés chez des rats hypertendus induits par L-NAME. Takir et al. ont démontré que l’extrait d’A. vulgaris provoquait des effets vasorelaxants et abaissant la pression artérielle chez ces rats. Ils ont conclu que ces effets bénéfiques d’A. vulgaris pourraient contribuer à la vasoprotection de l’endothélium vasculaire, qui est souvent altéré chez les patientes atteintes de SOPK. Conformément à ces études, il a été montré dans la présente étude que le traitement par AVE inverse la dysfonction endothéliale vasculaire induite par le SOPK. Ainsi, AVE pourrait avoir un effet protecteur contre la dysfonction endothéliale induite par le SOPK. Les propriétés vasoprotectrices d’AVE pourraient contribuer à son potentiel thérapeutique pour le traitement des femmes atteintes de SOPK.
Plusieurs études ont rapporté que la microalbuminurie est plus fréquente chez les femmes atteintes de SOPK que chez les femmes en bonne santé. En outre, des études cliniques ont suggéré un lien possible entre les facteurs de risque cardiovasculaire et une excrétion élevée d’albumine dans l’urine chez les patientes atteintes de SOPK. Dans la présente étude, les taux urinaires d’albumine et de protéines ont été évalués pour apprécier la fonction rénale dans le groupe SOPK, et aucune différence statistiquement significative n’a été trouvée dans les taux urinaires d’albumine et de protéines. Bien que des constatations cohérentes aient été observées dans tous les groupes dans nos conditions expérimentales, des études supplémentaires sont nécessaires pour étudier le rôle de la microalbuminurie dans le modèle animal de SOPK induit par la DHEA.
Conclusion
La présente étude a démontré que le modèle animal de SOPK induit par la DHEA présentait des changements endocriniens, métaboliques et vasculaires, avec une inflammation accrue. Ces altérations peuvent entraîner des changements de la morphologie ovarienne. Le traitement par AVE a inversé les perturbations hormonales induites par le SOPK, la dysfonction endothéliale vasculaire et les changements morphologiques ovariens. AVE pourrait avoir un potentiel thérapeutique en raison de ses effets anti-inflammatoires et vasorelaxants chez les patientes atteintes de SOPK.